Андрей Евгеньевич Быков (Иван Охлобыстин) — заведующий терапевтическим отделением больницы и руководитель четырёх интернов. Является отличным специалистом, но обладает скверным характером. Картавит. Часто ироничен до сарказма, колок и язвителен. Состоит в затяжном романе с главврачом больницы Анастасией Константиновной Кисегач. В прошлом — байкер по кличке Ящер[3]. Увлечённо играет в видеоигры. Трогательно ухаживает за цветком по имени Игорь. Время от времени разговаривает по телефону с космонавтом Иннокентием. Образ Быкова является отчасти подлинным. Отец Охлобыстина был главврачом, и черты характера отца частично вошли в образ самого актёра.

Иван Натанович Купитман (Вадим Демчог) — доктор-дерматовенеролог, заведующий кожно-венерологическим отделением больницы. Еврей. Лучший друг Быкова, с удовольствием поддерживает его, когда тот разыгрывает интернов. Умён и хитёр, но чаще — ловелас и увлекающаяся личность. Увлекается коньяком и крайне болезненно воспринимает замечания по поводу своего пристрастия, а также внешности и возраста. В работе считает себя жрецом богини любви Венеры, так как лечит больных, от неё пострадавших. В жизни — бытовой философ, в связи с чем многие ходят к нему за советами.

Семён Лобанов (Александр Ильин) — не очень сообразительный интерн, однако считает себя довольно опытным, так как с первого курса работал на скорой помощи. Всё время не высыпается и не имеет денег, поэтому частенько «стреляет» сигареты и деньги у коллег. Служил в армии. Был женат, но развёлся из-за того, что не разделял взглядов супруги на рождение ребёнка. Сторонник силового метода разрешения конфликтов. С пациентами общается «по-свойски», почти со всеми на «ты», кандидат в мастера спорта по боксу. Вновь помирился с бывшей женой Ольгой и теперь ждут ребенка.

Варвара Черноус (Кристина Асмус) — единственная женщина-интерн в терапевтическом отделении (до 161 серии). Сердобольна и наивна. Правдолюб, идеалист, не любит несправедливость и борется с ней всеми силами, однако, иной раз сама же, попав в затруднительную ситуацию, лжёт и оговаривает коллег. Впрочем, исполнительна, к заданиям Быкова подходит со всей серьёзностью, иногда слишком инициативна. В 156 серии Варя переводится в хирургическое отделение по собственному желанию и более не появляется.

Глеб Романенко (Илья Глинников) — сын главврача Анастасии Кисегач, имеет репутацию мажора. Завсегдатай клубов и тусовок, к девушкам относится потребительски. Имел роман с Варей Черноус. Чаще других конфликтует с Быковым, который возмущён «мажорским» поведением интерна, убеждённого во вседозволенности. Обладает хорошим чувством юмора.

Борис Левин (Дмитрий Шаракоис) — «ботаник» с красным дипломом, убеждённый в собственной исключительности, заносчив. Хорошо знает теорию медицины, но в случае возникновения неотложных ситуаций теряется. Пренебрежительно относится к младшему и среднему медперсоналу. Имел роман с Любой. В 56-ой серии уезжает на стажировку в одну из самых лучших клиник мира в Америке: в Принстон-Плэйнсборо (вымышленная больница из сериала Доктор Хаус) на 1 год.

Второстепенные персонажи
Ольга Лобанова (Татьяна Лянник) — жена интерна Семёна Лобанова (по сюжету они расходятся в 1 сезоне), со 2 сезона работает в больнице.
Алиса Андреевна Быкова (Мария Пирогова) — дочь Быкова. Имеет немало схожестей со своим отцом, таких как чувство юмора, сарказм, упрямство и даже медицинские способности.
Ирина Витальевна Шемякова (Лидия Арефьева) — заведующая психиатрическим отделением, во 2 сезоне проходит как объект симпатий интерна Лобанова.
Пётр и Павел (Максим Артамонов, Михаил Павлик) — санитары.
Вера (Татьяна Мухина) — секретарь главврача.
Галя (Елена Суркова) и Валя (Вероника Рис) — медсестры терапевтического отделения.
Иваныч (Эдуард Аблам) — электрик больницы. Питает слабость к алкоголю, имеет виды на Любу.
Давид Таймуразович Такоев (Вадим Цаллати) — врач-анестезиолог. Пользуется повышенным интересом у женской половины персонала больницы, являясь при этом объектом самых невероятных слухов. Предмет увлечения Варвары Черноус. Фанат ЦСКА.
Антон Павлович Ярославский (Андрей Андреев) — бизнесмен, любовник Кисегач, расстался с ней, не выдержав конкуренции с Быковым (74-89 серии).
Марина Александровна (Людмила Чурсина) — мать Анастасии Кисегач. Женщина строгих вкусов. При знакомстве с Быковым увидела его «во всей красе» — хамящим и бесцеремонным. Крайне недовольна выбором дочери.

В 35-й серии Кисегач говорит Быкову, чтобы тот «не включал доктора Хауса». Также в серии: Быков подворачивает ногу и потом ходит с тростью и подбрасывает теннисный мячик, в ординаторской стоит доска с написанными на ней симптомами болезни пациента, Лобанов и Романенко предполагают диагноз «волчанка», неоднократно звучит фраза «все врут» (любимое утверждение доктора Хауса — англ. Everybody lies). В конце серии показывают, что идея сериала «Доктор Хаус» возникла после общения «голливудского сценариста» с Быковым.
В 56-й серии Левин говорит Кисегач, что ему предложили пройти стажировку в клинике Принстон-Плейнсборо (вымышленная больница в сериале «Доктор Хаус»), также клинику упоминает Люба в 149 серии, когда собирается ехать к Левину в Америку.[12].
В 122-й серии Быков покупает мотоцикл Honda CBR, как у Хауса.

Главные герои — молодые интерны, руководитель интернатуры — отличный доктор, презирающий неопытность подопечных и постоянно с ехидством об этом им напоминающий[11].
Сходны многие сюжетные линии:

Варя, как и Эллиот Рид из «Клиники», стесняется названий интимных частей тела и учится произносить их вслух целую серию. Кроме того, в одной из серий она, так же как Эллиот, скрывает от пациента-женофоба тот факт, что является его врачом.
Доктор Быков советует Левину «снять напряжение», что в «Клинике» доктор Кокс советует Терку. В обоих случаях это становится, с подачи подстрекателя, достоянием общественности.
И в «Клинике», и в «Интернах» есть серия, в которой проводится параллель между наставниками и доктором Хаусом.